REVOVERESE协议版本问题

HI Tech支持团队,我们收到了有关Revoverease新协议的一些问题。你能告诉我们答案吗?

在P5,第25步中,“立即将含透析管的锥管旋转5-6秒,在500–1000×g处旋转。不要旋转超过6秒,因为这可能会导致膜破裂。”

Q1,当离心机达到500-1000 x G的适当速度时,我们是否应该计算5-6秒,而不是从启动旋转开始?我认为通常应该在达到所需速度后计数,但我想确认。

Q2,透析后我们应该立即开始旋转?如果我们不立即在透析后旋转管,会产生负面影响?

感谢您提前的支持。

此致,

Sayano Kinjo

  • 通常,大多数离心机将在不到启动的不到一秒钟内开始应用必要的力,因此,一旦离心开始,就可以开始计数5-6秒。显然,如果特定的离心机需要几秒钟才能达到产生500 x g的点,那么最好等到它达到产生该力的速度。

    立即离心的主要原因是,不应允许基因组DNA脱水,并且直到透析盖被储存帽代替后,锥管才无法密封。一旦密封管,就可以存储GDNA。

  • 嗨,阿尔伯特,

    感谢您的有益答复。我收到了一些其他问题。

    在协议中,p4,18步骤,陈述,

    “蛋白酶K消化步骤完成后,加入300μl
    TE缓冲液到DNA样品中,并使用宽孔的移液器搅拌样品。”

    客户询问他们是否可以将此TE缓冲区的体积从300 UL减少到150 UL,并增加透析时间超过5天(例如8天)。

    他们问这个问题的原因是,他们想增加透析后的GDNA浓度。为了做到这一点,他们认为减少TE缓冲量可能是一个好方法。

    我怀疑我们的研发是否曾经测试过这种情况,但是如果您有任何信息或想法,您可以分享吗?

  • 你好sayano,

    应用了产品手册中描述的条件,以使其与新的透析柱与旧透析杯的包装效率与新透析柱的包装效率匹配。

    显然,客户可以根据其下游应用程序尝试降低TE缓冲区并增加透析时间。但是,在我们手中,较低的缓冲液体积导致GDNA溶液太粘稠而无法有效处理。考虑到这些结果,如果客户不应用他们提出的更改,最好是最好的。

这个有帮助吗?